Purificazione e caratterizzazione della 6-PGD dal fegato di quaglia

In questo studio, l'enzima 6-fosfogluconato deidrogenasi (6PGD) è stato purificato dal fegato di quaglia utilizzando metodi di precipitazione con solfato di ammonio e cromatografia di affinità con 2', 5'-ADP Sepharose 4B, con attività specifiche di 14,6 EU/mg, resa dell'89% e 112 pieghe di purificazione. L'attività enzimatica è stata misurata spettrofotometricamente a 340 nm. L'SDS-PAGE ha verificato la purezza dell'enzima. Il peso molecolare dell'enzima purificato con il metodo SDS-PAGE è stato calcolato in 44 KDa. La determinazione delle proteine è stata eseguita con il metodo Bradford. Per l'enzima sono stati determinati il pH ottimale (8,0), il pH stabile (8,0), la forza ionica ottimale (600 mM in Tris-HCl) e la temperatura ottimale (60°C). Inoltre, i valori di KM e Vmax per il 6-fosfogluconato (6-PGA) e il NADP+ sono stati calcolati rispettivamente come 0,058 e 0,0015 mM; 0,0078 e 0,057 EU/ml.