Propiedades Opticas de Un Sistema de Epifluorescencia

En el presente trabajo se determinaron las propiedades pticas de un microscopio de epifluorescencia a travs del clculo de su funcin de transferencia (PSF). La determinacin se realiz en forma emprica utilizando microesferas fluorescentes patrn con un dimetro menor al poder de resolucin de las lentes. Se observ que el sistema produce alteraciones, ya que las imgenes de las microesferas luego de atravesar las pticas, exhiben una elongacin axial. Dicho fenmeno fue evaluado en diferentes arreglos pticos tridimensionales. Los cambios en la resolucin axial encontrados fueron analizados por medio de la determinacin del parmetro: ancho total a la mitad del mximo (FWHM) y geomtricamente a travs de la representacin tridimensional de la seal fluorescente dispersada. Se encontr que el arreglo tridimensional provoca una aberracin esfrica, y se dedujo que las lentes estn corregidas para trabajar slo con especmenes delgados (arreglos bidimensionales). Para poder trabajar en microscopa 3D, se recurri al proceso de desconvolucin, utilizando la PSF como estimador de las imperfecciones del sistema.