Vetenskap & teknik
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Identifizierung und Charakterisierung des HSP70 Makronukleus-Gens aus Euplotes crassus
Ulrich Reidt
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Diplomarbeit aus dem Jahr 1998 im Fachbereich Chemie - Biochemie, Note: 1,5, Philipps-Universitt Marburg (Unbekannt), Sprache: Deutsch, Abstract: Inhaltsangabe:Zusammenfassung:
Bei dem hypotrichen Ciliaten E.crassus wurde das Makronukleus-Chromosom, welches das HSP7O-Gen trgt, identifiziert. Fr die Identifikation eines internen Gen-Fragmentes wurde die Methode der heterologen PCR angewendet. Die 5'- und 3'-Enden des Gens konnten mit einem telomerspezifischen Primer und mit homologen Primern, die aus dem internen PCR-Fragment abgeleitet wurden, amplifiziert werden. Nach Sequenzierung der PCR-Fragmente und einem Vergleich der abgeleiteten Aminosuresequenzen mit Aminosuresequenzen aus weiteren Organismen wurde eine Homologie von bis zu 95 % festgestellt.
Untersuchungen zur Kopienzahl zeigten, da im Makronukleus das HSP7O-Gen in einer Kopienzahl von 2000-2500 Kopien vorlag. Dies entsprach der durchschnittlichen Kopienzaht von E.crassus.
Um Promotor-Elemente zu identifizieren, wurde der Transkriptionsstartpunkt bestimmt. Eine Analyse der 5'-nicht kodierten Region zeigte, da keine Sequenzhomologie zu den bekannten core-Promotor-Elementen TATA-Box und Initiator-Element bestand. Durch Sequenzvergleiche mit der bekannten Konsensussequenz der Hitze-Schock-Elemente wurden jedoch zwei Hitze-Schock-Elemente identifiziert.
Weitere Untersuchungen zur Expression des HSP7O-Gens nach Hitzeschock und ohne Hitzeschock erfolgten sowohl auf der Ebene der RNA als auch auf der Protein-Ebene. Durch eine Northern-Blot-Analyse wurde eine erhhte Transkripmenge der HSP70-mRNA in hitzeinduzierten Ciliaten festgestellt. Auf der Protein-Ebene zeigte sich jedoch kein quantitativer Unterschied zwischen hitzeinduzierten und nicht hitzeinduzierten Zellen.
Inhaltsverzeichnis:Inhaltsverzeichnis:
1.ZUSAMMENFASSUNG1
2.EINLEITUNG2
2.1Die Genomorganisation des hypotrichen Ciliat Euplotes crassus2
2.2Konjugation und Makronukleusentwicklung bei Euplotes crassus4
2.3Transk:riptinelle Regulation der
Bei dem hypotrichen Ciliaten E.crassus wurde das Makronukleus-Chromosom, welches das HSP7O-Gen trgt, identifiziert. Fr die Identifikation eines internen Gen-Fragmentes wurde die Methode der heterologen PCR angewendet. Die 5'- und 3'-Enden des Gens konnten mit einem telomerspezifischen Primer und mit homologen Primern, die aus dem internen PCR-Fragment abgeleitet wurden, amplifiziert werden. Nach Sequenzierung der PCR-Fragmente und einem Vergleich der abgeleiteten Aminosuresequenzen mit Aminosuresequenzen aus weiteren Organismen wurde eine Homologie von bis zu 95 % festgestellt.
Untersuchungen zur Kopienzahl zeigten, da im Makronukleus das HSP7O-Gen in einer Kopienzahl von 2000-2500 Kopien vorlag. Dies entsprach der durchschnittlichen Kopienzaht von E.crassus.
Um Promotor-Elemente zu identifizieren, wurde der Transkriptionsstartpunkt bestimmt. Eine Analyse der 5'-nicht kodierten Region zeigte, da keine Sequenzhomologie zu den bekannten core-Promotor-Elementen TATA-Box und Initiator-Element bestand. Durch Sequenzvergleiche mit der bekannten Konsensussequenz der Hitze-Schock-Elemente wurden jedoch zwei Hitze-Schock-Elemente identifiziert.
Weitere Untersuchungen zur Expression des HSP7O-Gens nach Hitzeschock und ohne Hitzeschock erfolgten sowohl auf der Ebene der RNA als auch auf der Protein-Ebene. Durch eine Northern-Blot-Analyse wurde eine erhhte Transkripmenge der HSP70-mRNA in hitzeinduzierten Ciliaten festgestellt. Auf der Protein-Ebene zeigte sich jedoch kein quantitativer Unterschied zwischen hitzeinduzierten und nicht hitzeinduzierten Zellen.
Inhaltsverzeichnis:Inhaltsverzeichnis:
1.ZUSAMMENFASSUNG1
2.EINLEITUNG2
2.1Die Genomorganisation des hypotrichen Ciliat Euplotes crassus2
2.2Konjugation und Makronukleusentwicklung bei Euplotes crassus4
2.3Transk:riptinelle Regulation der
- Format: Pocket/Paperback
- ISBN: 9783838610085
- Språk: Engelska
- Antal sidor: 88
- Utgivningsdatum: 1998-08-01
- Förlag: Diplom.de