Identification Et Caract risation Des Sites de Transport de Cada

L'objectif de cette thse tait la recherche des acides amins constituant la voie de passage du Cd2+ au sein du domaine transmembranaire de CadA. Ce travail a ncessit l'expression de CadA dans la levure Saccharomyces cerevisiae et la caractrisation du phnotype de sensibilit au Cd2+ induit par la prsence de CadA. Il a aussi ncessit une tude enzymatique de CadA au cours de laquelle nous avons montr que le Cd-ATP pouvait remplacer le Mg-ATP dans le cycle enzymatique de la protine. Quatre hlices transmembranaires (3, 4, 6 et 8) constitueraient la voie de passage du Cd2+ dans CadA. Au sein de ces hlices, les acides amins M149, C354 et T684 pourraient faire partie du site de liaison tandis que E164 et C356 pourraient tre importants dans le processus de dissociation du mtal. P355 et D692 seraient ncessaires la phosphorylation de l'enzyme. L'tude des domaines cytoplasmiques N (liaison des nuclotides) et P (phosphorylation) de CadA a t aussi aborde au cours de cette thse. La caractrisation fonctionnelle d'ATPases chimriques a mis en vidence la possibilit d'changer le domaine de phosphorylation entre diffrentes ATPases de type P.